De gevolgen van foutieve pcr-resultaten liegen er niet om. Om een paar voorbeelden te noemen: een verkeerde diagnose bij een kankerpatiënt, eieren met Salmonella in het winkelschap, of drinkwater besmet met E. coli.
Mary Span beantwoordt vijf vragen over potentiële missers bij de pcr met een belangrijke rol voor het goed functioneren van de thermische cycler, je ‘pcr machine’.
De gevolgen van foutieve pcr-resultaten liegen er niet om. Om een paar voorbeelden te noemen: een verkeerde diagnose bij een kankerpatiënt, eieren met Salmonella in het winkelschap, of drinkwater besmet met E. coli.
Een pcr is een biochemische reactie die exponentieel verloopt, waardoor kleine fouten een groot effect hebben. Een beetje te veel of te weinig reagentia levert al snel incorrecte of negatieve resultaten op. Maar ook het apparaat, de thermal cycler, kan de oorzaak van de verkeerde uitslag zijn.
De thermal cycler dient de ingestelde temperaturen nauwkeurig te bereiken en snel hiertussen te kunnen wisselen. Wanneer de thermal cycler te heet wordt leidt dit tot inactivatie van het Taq polymerase enzym met negatieve pcr-resultaten tot gevolg. Wanneer de thermal cycler te koud blijft kan de reactie niet specifiek verlopen met incorrecte resultaten tot gevolg.
Het functioneren van een thermal cycler kan beoordeeld worden tijdens een prestatietest. De in 2021 gepubliceerde ISO 20836 beschrijft een gestandaardiseerde methode voor deze prestatietesten.
ISO/IEC 17025 en ISO 15189 geaccrediteerde laboratoria dienen kritische apparatuur metrologisch herleidbaar te kalibreren. De ISO 20836 beschrijft zowel een prestatietest als een metrologisch herleidbare kalbratiemethode voor geaccrediteerde laboratoria.
Om de kwaliteit te waarborgen dient een laboratorium alle variabelen in het pcr-proces onder de loep te nemen, dus niet enkel de reagentia.
Ontdek tijdens de cursus ‘Kwaliteitsborging bij pcr-technieken’ hoe je tot betrouwbare en valide pcr-resultaten komt door ook ‘vergeten’ variabelen in beschouwing te nemen.
